{"id":12892,"date":"2024-06-06T10:40:06","date_gmt":"2024-06-06T09:40:06","guid":{"rendered":"https:\/\/www.mercatcarnibcn.com\/?p=12892"},"modified":"2024-06-06T10:40:06","modified_gmt":"2024-06-06T09:40:06","slug":"desarrollan-una-nueva-prueba-para-la-deteccion-economica-de-distintos-genotipos-de-la-peste-porcina-clasica","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.mercatcarnibcn.com\/es\/desarrollan-una-nueva-prueba-para-la-deteccion-economica-de-distintos-genotipos-de-la-peste-porcina-clasica\/","title":{"rendered":"Desarrollan una nueva prueba para la detecci\u00f3n econ\u00f3mica de distintos genotipos de la peste porcina cl\u00e1sica"},"content":{"rendered":"

\u200bEl estudio muestra el desarrollo de una herramienta novedosa para la detecci\u00f3n del virus de la peste porcina cl\u00e1sica, que puede tener importantes aplicaciones en un entorno de campo<\/h4>\n
La peste porcina cl\u00e1sica (CSF), una de las enfermedades m\u00e1s importantes de la sanidad animal, sigue siendo un reto para el control de la enfermedad. Est\u00e1 causada por el virus de la PPC (VPPC), un virus ssRNA (+), miembro del g\u00e9nero Pestivirus.\u00a0Las estrategias de control contra la PPC dependen de un diagn\u00f3stico r\u00e1pido<\/strong>, principalmente pruebas ELISA para anticuerpos anti-CSFV, as\u00ed como de la detecci\u00f3n molecular del ARN viral mediante RT-PCR en tiempo real (RT-qPCR) (OMSA, 2019). Aunque han demostrado ser muy \u00fatiles, estas t\u00e9cnicas requieren el uso de\u00a0equipos especializados<\/strong>\u00a0que no est\u00e1n f\u00e1cilmente disponibles en las proximidades de las granjas o mataderos donde se realizan las pruebas. Adem\u00e1s, el equipo especializado, y el personal altamente cualificado, para llevar a cabo las pruebas RT-qPCR tampoco est\u00e1 f\u00e1cilmente disponible en muchos pa\u00edses en desarrollo. Esto\u00a0aumenta considerablemente el tiempo necesario para obtener un resultado<\/strong>, lo que a su vez aumenta el tiempo para tomar medidas para controlar la infecci\u00f3n en los reba\u00f1os afectados.<\/div>\n
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La PCR de amplificaci\u00f3n isot\u00e9rmica mediada por bucle (LAMP) plantea una de las alternativas m\u00e1s interesantes, debido a sus m\u00e9todos de detecci\u00f3n. La LAMP-PCR puede realizarse mediante detecci\u00f3n fluorom\u00e9trica, con la ayuda de equipos f\u00e1cilmente transportables, o incluso mediante detecci\u00f3n colorim\u00e9trica, observable a simple vista. El objetivo de un\u00a0estudio\u00a0<\/a>realizado por\u00a0Adriana Mu\u00f1oz Aguilera<\/strong>,\u00a0Liani Coronado<\/strong>,\u00a0Rosa Rosell<\/strong>, y\u00a0M\u00f2nica Alberch<\/strong>\u00a0del IRTA-CreSA (Centro de Investigaci\u00f3n Sanidad Animal); y\u00a0Jose Alejandro Boh\u00f3rquez<\/strong>,\u00a0Saraswathi Lanka\u00a0<\/strong>y\u00a0Carol W. Maddox<\/strong>\u00a0de la Universidad de Illinois, fue dise\u00f1ar y validar un nuevo ensayo LAMP para la\u00a0detecci\u00f3n r\u00e1pida<\/a>, sensible, espec\u00edfica y econ\u00f3mica del ARN del VPPC en formatos fluorom\u00e9trico y colorim\u00e9trico para ser validado junto con el ensayo RT-qPCR de referencia del VPPC.<\/p>\n

T\u00c9CNICA DE PCR DE AMPLIFICACI\u00d3N ISOT\u00c9RMICA MEDIADA POR BUCLE<\/strong><\/p>\n

Se desarroll\u00f3 una t\u00e9cnica de PCR de amplificaci\u00f3n isot\u00e9rmica mediada por bucle (LAMP), con cebadores dise\u00f1ados teniendo en cuenta todos los genotipos del virus de la peste porcina cl\u00e1sica notificados. La reacci\u00f3n se ensay\u00f3 mediante detecci\u00f3n fluorom\u00e9trica y colorim\u00e9trica, en comparaci\u00f3n con la t\u00e9cnica de referencia.\u00a0Se analizaron cepas virales de tres genotipos circulantes del virus de la peste porcina cl\u00e1sica<\/strong>, as\u00ed como muestras de animales infectados. Tambi\u00e9n se ensayaron otros pat\u00f3genos, para determinar la especificidad de la PCR LAMP. Adem\u00e1s de los m\u00e9todos de extracci\u00f3n de ARN en laboratorio, se evalu\u00f3 un m\u00e9todo de calentamiento para la liberaci\u00f3n de ARN, f\u00e1cilmente adaptable a las condiciones de campo.<\/p>\n

Se generaron tres conjuntos de cebadores, uno de los cuales mostr\u00f3 un mejor rendimiento. Este conjunto de cebadores demostr\u00f3 ser capaz de mantener un rendimiento \u00f3ptimo a diversas temperaturas de amplificaci\u00f3n (60\u00b0C \u2013 68\u00b0C).\u00a0Se analizaron cepas virales de tres genotipos circulantes del virus de la peste porcina cl\u00e1sica<\/strong>, as\u00ed como muestras de animales infectados. Tambi\u00e9n se ensayaron otros pat\u00f3genos, para determinar la especificidad de la PCR LAMP. Adem\u00e1s de los m\u00e9todos de extracci\u00f3n de ARN en laboratorio, se evalu\u00f3 un m\u00e9todo de calentamiento para la liberaci\u00f3n de ARN, f\u00e1cilmente adaptable a las condiciones de campo.<\/p>\n

Vale la pena destacar que el ensayo LAMP, ya sea por detecci\u00f3n fluorom\u00e9trica o colorim\u00e9trica, mostr\u00f3 una sensibilidad similar a la del ensayo RT-qPCR del CSFV reportado por Hoffmann et al., 2005, al evaluar muestras de ARN extra\u00eddas magn\u00e9ticamente del genotipo 1. Por el contrario, el uso de esta prueba CSFV-LAMP sobre el terreno utilizando un equipo m\u00ednimo, en particular mediante detecci\u00f3n colorim\u00e9trica, \u201cpuede verse limitado al intentar analizar muestras de suero, ya que todas ellas resultaron negativas al evaluar muestras de suero hervidas\u201d, indican los autores.<\/p>\n

Esto puede deberse a las capacidades tamp\u00f3n del suero, que dificultan la variaci\u00f3n del pH de la mezcla maestra y, por tanto, el cambio colorim\u00e9trico. En un estudio anterior se inform\u00f3 de problemas similares en ensayos LAMP colorim\u00e9tricos. Por lo general, \u201ceste fen\u00f3meno puede resolverse mediante la diluci\u00f3n del suero, como ocurri\u00f3 con las muestras de animales infectados con la cepa Catalonia del genotipo 2 del virus de la peste porcina cl\u00e1sica\u201d. No obstante,\u00a0esta posible limitaci\u00f3n puede superarse mediante el uso de otras muestras m\u00ednimamente invasivas<\/strong>, como hisopos nasales y rectales, que no mostraron estos problemas y pueden recogerse de forma menos invasiva e incluso con menos entrenamiento en el entorno de una granja, indican.<\/p>\n

Adem\u00e1s, los resultados obtenidos utilizando muestras de cerdos infectados experimentalmente con la cepa del genotipo 2 del virus de la peste porcina cl\u00e1sica evidenciaron un\u00a0mejor rendimiento del m\u00e9todo de detecci\u00f3n colorim\u00e9trico que del fluorom\u00e9trico<\/strong>. La reacci\u00f3n LAMP colorim\u00e9trica \u201ccoincidi\u00f3 con el 93,3 % de los resultados de la RT-qPCR y fue capaz de detectar ARN viral en todas las muestras, independientemente del m\u00e9todo de extracci\u00f3n, tras 14 d\u00edas de infecci\u00f3n\u201d. Esto lo consideran particularmente alentador, teniendo en cuenta que la carga de ARN viral en algunos de los hisopos nasales y rectales a los 7 dpi estaba cerca del l\u00edmite de detecci\u00f3n de la RT-qPCR<\/p>\n

UNA ALTERNATIVA \u00daTIL PARA LA DETECCI\u00d3N PRECOZ DEL VPPC<\/strong><\/p>\n

Un posible inconveniente de la prueba CSFV-LAMP reside en la detecci\u00f3n inespec\u00edfica del nuevo ARN viral del OVPV. Este resultado \u201cno es del todo sorprendente\u201d, dada la estrecha proximidad gen\u00f3mica del OVPV con el CSFV, as\u00ed como el hecho de que el ARN de este virus puede detectarse mediante la RT-qPCR del CSFV descrita anteriormente por Hoffman et al., 2005. Sin embargo, con los resultados obtenidos con el formato colorim\u00e9trico, \u201cs\u00f3lo es posible detectar el OVPV en un resultado dudoso si circula una gran cantidad de carga viral\u201d.<\/p>\n

As\u00ed, los autores destacan la\u00a0r\u00e1pida capacidad de este virus para generar anticuerpos tras la infecci\u00f3n<\/strong>, lo que en cualquier caso favorecer\u00eda la reducci\u00f3n de la carga viral circulante y, por tanto, la reactividad cruzada del OVPV con la prueba aqu\u00ed desarrollada. Adem\u00e1s, sugieren que es poco probable que la reacci\u00f3n cruzada del ensayo LAMP con OVPV se traslade a un contexto de campo, ya que \u201cel \u00fanico estudio relativo a la infecci\u00f3n experimental de cerdos con OVPV mostr\u00f3 que la carga de ARN viral detectada en cerdos tras la infecci\u00f3n es muy inferior a la utilizada para la prueba del ensayo LAMP en el presente estudio\u201d.<\/p>\n

En resumen, los resultados del presente estudio \u201cmuestran el desarrollo de una herramienta novedosa para la detecci\u00f3n del virus de la peste porcina cl\u00e1sica<\/strong>, que puede tener importantes aplicaciones en un entorno de campo, donde siguen persistiendo formas subcl\u00ednicas y cr\u00f3nicas de la enfermedad\u201d. Algunas de estas formas de la enfermedad \u201cno pueden diagnosticarse mediante las t\u00e9cnicas serol\u00f3gicas utilizadas habitualmente en los programas de vigilancia, y su detecci\u00f3n depende de la amplificaci\u00f3n del \u00e1cido nucleico\u201d. El uso conjunto de t\u00e9cnicas de diagn\u00f3stico novedosas y tradicionales podr\u00eda resultar \u201cuna alternativa \u00fatil para la detecci\u00f3n precoz del VPPC<\/strong>, lo que se prestar\u00eda a una actuaci\u00f3n m\u00e1s r\u00e1pida y tendr\u00eda un impacto global positivo en la erradicaci\u00f3n de la enfermedad\u201d. Por lo tanto, los autores comentan que es\u00a0necesario establecer\u00a0<\/strong>normas y directrices oficiales\u00a0<\/a>para el uso de pruebas de diagn\u00f3stico<\/strong>\u00a0en el punto de atenci\u00f3n en los programas de vigilancia y control de enfermedades de declaraci\u00f3n obligatoria para la OMSA.<\/p>\n

Fuente: Diario Veterinario<\/a><\/p>\n<\/div>\n<\/div>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

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